大家好，今天给各位分享RNA m6A修饰介导Hippo信号通路在肝癌血管新生中的作用机制研究的一些知识，其中也会对进行解释，文章篇幅可能偏长，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在就马上开始吧！
肝癌是癌症相关死亡的第四大常见原因，在全球发病率中排名第六。肝细胞癌（HCC）占原发性肝癌的大部分。尽管近年来HCC的治疗取得了很大进展，但HCC患者的预后仍然较差。血管生成对于促进肝细胞癌的生长和转移至关重要。先前的研究表明，肿瘤中的血管仅由内皮细胞形成。自20 世纪90 年代以来，许多制药公司专注于开发抑制血管生成的化合物，以“饿死肿瘤细胞”。一些药物，例如阿瓦斯汀（Avastin）和多吉美（Nexavar），在美国被批准用于癌症治疗。然而，这些药物只能暂时减缓肿瘤生长，并不能完全杀死肿瘤细胞。此外，许多用这些药物治疗的肿瘤常常会产生耐药性或转移。 1999年，Maniotis发现了血管生成拟态（VM）。他认为肿瘤中的功能性供血通道可能与内皮细胞无关，而是由侵袭性肿瘤细胞形成的。这一发现为肿瘤的血液供应提供了新的视角。迄今为止，VM存在于多种癌症类型中，如黑色素瘤、卵巢癌、结直肠癌、喉鳞状细胞癌、HCC等，且与患者不良预后相关。 VM是由侵袭性肿瘤细胞形成的模拟血管生成网络，在肝细胞癌的恶性发展中发挥着重要作用。然而，VM的发病机制很复杂且尚未完全了解。 N6-甲基腺苷(m6A) 是真核mRNA 中最丰富的可逆甲基化修饰。近年来，许多研究集中在m6a修饰的mRNA的生物学功能上。 m6A修饰已被发现参与多种生物过程，并在癌症进展中发挥重要作用。然而，m6A 和VM 形成之间的关系尚不清楚。
研究成果
METTL3在临床HCC组织中的表达与VM和患者不良预后相关
作者使用CD34 或CD31 和高碘酸希夫(PAS) 双染色来区分基质VM 的形态模式特征。首先，对75 名HCC 患者进行了回顾性研究。经过CD31-PAS双染和IHC染色后，根据VM数量和METTL3染色强度将病理组分为4个亚组：VM+/METTL3+、VM-/METTL3+、VM+/METTL3-和VM-/METTL3 .生存分析显示，双阳性组的生存率明显低于双阴性组。此外，METTL3染色强度也与VM的数量呈正相关。对96 名HCC 患者进行了共表达分析。作者发现METTL3与上皮标志物E-cadherin、VM标志物VE-cadherin、VEGFR1和VEGFR2的表达呈负相关，间充质细胞标志物Vimentin、肿瘤VM微环境标志物、MMP2和MMP9呈正相关。此外，TCGA数据显示，364例肝癌患者中METTL3的表达与VM相关蛋白CDH5、VIM、FLT1、KDR、MMP2、MMP9、FN1和SERPINE2呈正相关。另外，根据METTL3 mRNA表达量将患者分为两组，即：METTL3高表达组和METTL3低表达组。使用GSEA富集两组之间的差异基因以寻找METTL3相关通路。 VEGFa信号通路显着富集。这些数据表明METTL3参与了肝细胞癌VM的形成并与不良预后密切相关。
VM 形成受mRNA m6A 水平调节
接下来，我们进一步探讨了m6A修饰与VM形成之间的关系。尽管多种细胞外配体和微环境可以诱导VM，但VEGFa被认为是HCC细胞中这一过程的主要诱导剂。作者用VEGFa 处理3D 培养的HepG2 和MHCC-97H 细胞后，发现细胞的成管能力显着提高，m6A/mRNA 水平显着升高。同时，使用METTL3 siRNA降低m6A水平后，细胞的管形成能力下降，VE-cadherin表达受到抑制，E-cadherin表达增加；此外，VEGFa诱导的E-钙粘蛋白下调和VE-钙粘蛋白上调得到恢复。细胞中过表达ALKBH5（m6A去甲基酶）后，m6A水平显着低于对照细胞，成管能力弱。上述数据表明，m6A mRNA水平可能在体外调节肝细胞癌中VM的形成。
Hippo 通路参与m6A 依赖性VM 形成
在明确VM的形成受mRNA m6A水平调控后，作者进一步探讨了其机制。 RNA-seq分析了siNC组和siMETTL3组（3D培养后）转录组差异，共鉴定出149个差异表达基因。将这些差异基因与GSE110320 中m6A 修饰的基因重叠，我们发现大多数（75%）差异基因的mRNA 被m6A 修饰。重叠基因的GO分析显示，在癌症恶性发展中起重要作用的Hippo信号通路被富集。 MeRIP数据分析结果显示，YAP1 mRNA中m6A修饰丰度较高，尤其是CDS区域。而且，MeRIP-qPCR结果显示，在METTL3敲除细胞中，YAP1 mRNA的m6A修饰水平显着降低。
YAP1 在体外以m6A 依赖性方式促进VM 形成和癌症进展
接下来，作者进一步分析了YAP1参与VM形成及其与m6A的关系。首先，WB检测YAP1的表达。使用siRNA敲低METTL3水平后YAP1的表达下调，并在过表达ALKBH5和VEGFa诱导后上调。此外，过表达YAP1可显着促进VM标志物VE-cadherin的表达，降低上皮标志物E-cadherin的表达；下调METTL3可以显着挽救YAP1过表达引起的VE-cadherin水平升高； YAP1显着增加VM形成并增强细胞迁移和侵袭，同时敲低METTL3，细胞功能恢复。总之，YAP1 在体外以m6A 依赖性方式促进VM 形成和肿瘤进展。
m6A 提高YAP1 mRNA 的翻译效率
此前发现YAP1的表达受m6A水平的调节。那么，m6A修饰是如何调控YAP1的表达的呢？随后作者进一步研究了m6A甲基化调节YAP1表达的机制。敲低METTL3后，检测YAP1的前体mRNA和mRNA表达水平。令人惊讶的是，干扰METTL3 后YAP1 的转录水平增加。然后我们使用放线菌素-D（放线菌素）来阻断细胞的转录。结果表明，METTL3干扰后，pre-mRNA和mRNA的半衰期显着延长。 YAP1 mRNA 和蛋白质水平之间的异步性使作者怀疑m6A 修饰可能与YAP1 蛋白质的翻译或稳定性有关。接下来，用蛋白质翻译抑制剂放线菌酮处理METTL3 敲低细胞和相应的对照细胞。 WB测试结果显示，两组实验蛋白的半衰期没有明显变化。进一步采用双荧光素酶法测定YAP1蛋白的翻译效率。敲除METTL3后，YAP1蛋白的翻译效率显着降低。提示m6A诱导的YAP1表达与蛋白质翻译的调控有关。通过蔗糖密度梯度差速离心分离HepG2的总RNA。作者分析了核糖体谱。实验结果发现核糖体翻译起始复合物的组装明显减少，qPCR检测显示siMETTL3细胞翻译激活多聚体状态下YAP1的表达mRNA水平明显降低。综上所述，m6A主要通过影响翻译效率来改变YAP1蛋白的表达。
沉默METTL3 抑制肝细胞癌原位移植肿瘤模型中VM 形成和肿瘤进展
明确体外机制后，作者随后利用原位肝癌移植肿瘤模型研究m6A甲基化对体内肝癌转移和VM形成的潜在影响。首先，将表达sh-contorl和sh-METTL3的SK-Hep1-Luc细胞注射到裸鼠的肝脏中。结果显示，shMETTL3组裸鼠全身及肺组织的荧光素酶信号均受到抑制； Kaplan-Meier生存分析表明sh-METTL3裸鼠具有良好的预后。而且，裸鼠中shMETTL3的肿瘤病变和VM计数显着低于对照小鼠。免疫组织化学染色分析显示，在shMETTL3组中，VM标记物VE-cadherin和其他参与VM、MMP2、MMP9和纤连蛋白的蛋白的表达水平降低。同时，YAP1的表达也受到抑制，而E-cadherin的表达则增加。综上所述，m6A甲基化可以促进体内肿瘤进展和VM形成。
m6A依赖性YAP1表达促进DEN诱导的Mettl3+/-肝癌小鼠模型中VM形成和肿瘤转移
为了进一步研究m6A和YAP1在体内癌症进展和VM形成中的作用，作者使用CRISPR-Cas9系统生成了Mettl3+/-C57BL6/J小鼠（敲除METTL3是胚胎致死性的，敲除一个等位基因），它可以发现METTL3在小鼠肝组织中显着下调。随后，作者使用DEN（二乙基亚硝胺）治疗小鼠以诱导HCC 模型。模型成功建立后，一半的Mettl3+/-小鼠接受了治疗。将YAP1质粒注射至尾静脉，即Mettl3+/-+ YAP1组。另一半Mettl3+/-小鼠用对照质粒、Mettl3+/-+载体组和野生型处理。型小鼠使用对照质粒，Wt+载体组。实验结果发现，Mettl3+/-+Vector组小鼠的肿瘤病灶明显小于Wt+Vector组，且接受YAP1质粒注射后，减少的肿瘤病灶明显恢复。肺转移病灶和VM的检测结果相似。与Wt+Vector组相比，Mettl3+/-+Vector组肺转移病灶和VM数量明显减少，注射YAP1质粒后恢复。免疫组织化学染色分析显示，Mettl3+/-+Vector 小鼠中VE-cadherin、MMP2 和MMP9 的表达降低，而YAP1 的过表达则挽救了METTL3 敲除的效果。这些数据表明，在DEN诱导的Mettl3+/-肝癌小鼠模型中，敲除METTL3可以减弱其对癌症进展和VM形成的影响，而YAP1则恢复敲除METTL3的效果。
总结
关于RNA m6A修饰介导Hippo信号通路在肝癌血管新生中的作用机制研究和的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。
【RNA m6A修饰介导Hippo信号通路在肝癌血管新生中的作用机制研究】相关文章：
2.米颠拜石
3.王羲之临池学书
8.郑板桥轶事十则
用户评论
这研究真酷啊！没想到 RNA 甲基化和血管生成之间有这么大的联系。
有6位网友表示赞同！
所以说，癌症的发展原来是多方作用的结果呀！
有12位网友表示赞同！
这个 Hippo 通路越来越重要了，以前很少听说过它。
有10位网友表示赞同！
看来治疗肝癌以后得考虑RNA甲基化机制了
有14位网友表示赞同！
这研究能为肝癌的诊断和治疗提供新思路吧？
有9位网友表示赞同！
血管生成对于肿瘤的生长至关重要啊！
有18位网友表示赞同！
没想到 RNA 还能起到这样的作用，真是让人大开眼界！
有16位网友表示赞同！
希望这方面的研究能够早日取得突破，为肝癌患者带来福音。
有20位网友表示赞同！
这种新的治疗方法真的有望吗？
有9位网友表示赞同！
这个 RNA m6A 甲基化跟癌症的关系究竟是什么呢？
有14位网友表示赞同！
是不是以后我们可以通过检测 RNA 甲基化状态来判断肝癌的风险？
有14位网友表示赞同！
Hippo 通路的研究真是越来越深入了，对我们了解癌细胞发展很有帮助。
有18位网友表示赞同！
这个研究成果会应用到临床实践吗？
有7位网友表示赞同！
真期待看到更多关于 RNA 甲基化的研究成果！
有20位网友表示赞同！
希望科学家们能继续努力，为肝癌患者找到更好的治疗方法！
有9位网友表示赞同！
血管生成拟态的形成机制还真是复杂啊！
有15位网友表示赞同！
这个结果能不能用来开发新的药物？
有19位网友表示赞同！
RNA 甲基化在肿瘤生物学研究中扮演着怎样的角色呢？
有18位网友表示赞同！
这篇文章真是太专业了，读起来有点晕。
有16位网友表示赞同！
总之，这是一个很有价值的研究成果。
有7位网友表示赞同！